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用无菌剪刀剪开小白鼠皮肤,暴露腹膜。用吸管注入 6 ml培养液,反复冲洗,吸出冲洗液,再放入 10 ml离心管。
用 20小牛血清的培养液混悬,调整细胞数为 1105/ml加入 96孔板,100ul/孔。放入 37度孵箱培养。
这样下来巨噬细胞的制备就算完成了,接下来是骨髓瘤细胞的准备。
于融合前 48-36小时,将骨髓瘤细胞扩大培养,融合当天,用弯头滴管将细胞从瓶壁轻轻吹下,收集于 50 ml离心管或融合管内。
再用离心机以1000转每分钟离心 5-10分钟,弃去上清。
加入 30 ml不完全培养基,离心洗涤一次。然后将细胞重悬浮于 10 ml不完全培养基,混匀。
取骨髓瘤细胞悬液
这一步看起来简单,但是操作很稀碎,几个人累的腰酸背疼的。
再下来是脾细胞的准备,
取已经免疫的小白鼠,摘除眼球采血,并分离血清作为抗体检测时的阳性对照血清。
同时通过颈脱位致死小鼠,浸泡于 75酒精中 5分钟,于培养皿上固定后掀开左侧腹部皮肤,可看到脾脏,换眼科剪镊,在超净台中用无菌手术剪开腹膜,取出脾脏置于已盛有 10 ml不完全培养基的平皿中,轻轻洗涤,并细心剥去周围结缔组织。
这一步完全是胡嘉然的表演时间,高风要特别集中注意力才能跟上他的步骤,李友良和程松表现的更不堪,两个人做完2个,发现胡嘉然已经做好8个了。
“要不都包给嘉然算了。”程松整个人都不好了,“这对于我来讲太难了。”
“你别跟嘉然比。”李友良安慰他道,“咱们这才是正常的操作速度,他是特例,可能是单身太久练就的双手熟练度。”
由于还要进行细胞融合和杂交瘤细胞的选择,中间没法停留太长时间,几人直接忙到了凌晨3点多。
“好了,下来就是单克隆抗体的筛选了。可以歇一下了。”大家拖着疲惫的身躯离开了科研楼。
高风
“我姑妈他们2个也来了,不知道来干嘛的。”李欣瑶有一点不高兴,看来心里对姑妈印象还是不好啊。
“哎呀,高风回来了。”李玲玉赶紧从沙发上站了起来,“快坐下歇歇。”
丈夫毛建峰赶紧去拿桌子上的一次性纸杯去给高风接水。
李爸李妈
“中邪了吧。”李妈看向李爸。
李爸也是有点纳闷,不过表情逐渐变得凝重,他这个妹妹、妹夫可是无利不起早的人,这是盯上高风哪里了吧。
“累不累啊?听欣瑶说你最近上班可忙,可得注意身体啊。”李玲玉很关切的说道,“你们都是医生,身体健康的重要性可比我们懂。”
高风陪着说了几句,毕竟是长辈呢,人家这次态度也很好。
“建峰最近不是又弄了2个加油站嘛,想着匀一个给你们。”李玲玉对李爸说,“一年下来也不少钱,反正比你上班强得多。”
李爸听了后脸色更差了,“小妹,你来下,我有点事问你。”
他转身带着李玲玉走到了客卧,“你在搞什么?给我老老实实的交代!”